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在小鼠體內(nèi)的組織分析

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2020-04-03 09:38【

1 材料 


1.1 儀器 


2695 型高效液相色譜(HPLC)儀(美國 Waters 公 司);64R 型低溫高速離心機(德國 Beckman 公司); BT25S型電子天平(德國Sartorius公司);HSC-12B型水 浴氮吹儀(上海旦鼎國際貿(mào)易有限公司);QL-901 Vortex 型渦旋混合器(江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司);T18型高速分散機(德國IKA公司);Scientz-ⅡD型 超聲波細(xì)胞破碎機(寧波新芝生物科技股份有限公司)。 


1.2 藥品與試劑 


AP 對照品(批號:2015109,純度:≥99%)、AP 原料 藥(批號:XC2014122,純度:≥98%)均購自西安小草植 物科技有限公司;聚乙烯吡咯烷酮(PVP,天津博迪化工 有限公司);水溶性維生素E(TPGS,美國Sigma公司); 甲醇為色譜純,其余試劑均為分析純,水為超純水。 


1.3 動物 


清潔級昆明種小鼠,雌雄各半,2月齡,體質(zhì)量(20± 2)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供,動物使用 許可證號:SYXK(黑)2018-007。


2 方法與結(jié)果


色譜柱:Shimadzu ODS-SP(250 mm× 4.6 mm,5 μm);流動相:甲醇-水(70∶30,V/V);檢測器:紫外檢測器;檢測波長:340 nm;柱溫:35 ℃;流速:1.0 mL/min;進(jìn)樣量:20 μL。精密稱取 AP 對照品 4.89 mg,溶于適量甲醇中,制成質(zhì)量濃度為1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn) 溶液。用甲醇將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋成不同質(zhì)量濃 度的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,于4 ℃冰箱中保存,備用。取小鼠空白血漿100 μL至離 心管中,加入甲醇500 μL,渦旋振蕩,混勻,以8 000 r/min 離心 5 min,吸取上清液,以氮氣流吹干,殘渣用甲醇 100 μL 復(fù)溶,以 10 000 r/min 離心 5 min,吸取上清液適 量,進(jìn)行HPLC定量分析。


3 討論


采用蛋白沉淀法對血漿/組織樣品進(jìn)行處理, 并比較了乙腈和甲醇作為沉淀劑的蛋白沉淀效果。結(jié) 果發(fā)現(xiàn),以甲醇作為沉淀劑的效果更好,因此本研究選 擇甲醇作為蛋白沉淀劑。由于AP的溶解性極差,且目前并無市售的口服制 劑,故本研究采用復(fù)合溶媒[聚乙二醇-乙醇-生理鹽水 (5∶2∶3,V/V/V)]對 AP 原料藥進(jìn)行溶解。與常用乳劑 參比制劑相比,復(fù)合溶媒所含輔料少、制備方法簡單且穩(wěn)定性好,以復(fù)合溶媒溶解的AP溶液作為參 比制劑,進(jìn)行體內(nèi)組織分布研究及靶向性評價。






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